方法注解

食品中大肠菌群测试片

方法编号：5022

1 适用范围：适用于各类食品、原料和纯净水等样品中大肠菌群的快速测定。

2 方法原理：将乳糖、显色剂和选择性培养基加载在纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。

3方法特点：与国标法中的九管法相对应，将原来几步的试验简化为一步，时间由78h缩短为24h以内，省去了制备培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，随时可以打开包装进行抽样检测。

4 操作方法

4.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL灭菌生理盐水的采样瓶或均质杯中，经充分振摇做成1：10的样品匀液，用1mL灭菌吸管吸取1：10样品匀液，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管制成1：100的稀释液。以此类推，每个稀释度更换一支灭菌吸管。

4.2接种：选取两个稀释度进行接种，普通食品一般采用1：10和1：100这两个稀释度，饮料和饮用水采用原液和1：10两个稀释度。每份由三片大纸片（接10mL）,六片小纸片（接1mL）组成,大片每小袋二张叠放算作一片。用灭菌吸管吸取10 mL 1：10稀释液加到含有大纸片的塑料袋中（相当于接样品1g），吸透后平放，做三个重复。再用1mL灭菌吸管吸取1 mL同一稀释液涂布到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.1g），做三个重复。再取一支1 mL灭菌吸管吸取1 mL 1：100稀释液涂布到含有小纸片的塑料袋中（相当于接样品0.01g），做三个重复。

4.3 培养：将接种好的纸片（可叠放）放入37°C培养箱中培养15h～24h。

5结果判断与计数：若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性纸片。纸片保持紫兰色不变或在紫兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄色均为大肠菌群阴性纸片。记录每个稀释度大肠菌群阳性纸片数，根据大肠菌群MPN表查出相应的大肠菌群数。如接种的第一个稀释度的稀释液为原液，应将表上查出的结果除以10，以此类推。

6注意事项：如果样品的酸碱度在pH7以下，应先用灭菌1mol/L氢氧化钠（NaOH）调节溶液调至中性，避免因pH的原因导致的纸片变黄而影响结果观察。

有问有答