蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测

酶抑制率法(分光光度法)专用试剂  使用说明

 

本试剂为国家标准快速检验方法GB/T5009.199-2003的专用配套试剂。酶活性和对农药的灵敏度指标均达到或超过了国家标准要求,可以在各种型号的农药残毒检测仪(分光光度法)上使用,具有稳定性好、灵敏度高和使用方便等特点。

一、试剂配制

1. 缓冲液试剂:整包倒入大烧杯中,加1000mL纯净水溶解,酸碱度为pH8.0,常温保存;

2. 乙酰胆碱酯酶:取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解,4冰箱中保存,一周内用完。也可将溶解后的酶液分成几个小瓶,将其冷冻,用时融化,但不能重复多次冷冻、化解。

3. 显色剂:取一支显色剂加入20mL缓冲溶液,避光保存;

4. 底物:取一支底物加20mL缓冲溶液,摇匀后置4冰箱中保存;

二、分析步骤

1. 样品处理:选取有代表性的蔬菜样品,冲洗掉表面泥土,剪成1cm左右见方碎片,取样品1g,(非叶菜类取2g)放入烧杯或提取瓶中,加入5mL缓冲溶液,手摇振荡12分钟,或超声波振荡30秒钟,倒出提取液,静置3~5min,待用。

2. 对照溶液测试: 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂,再加入2.5mL缓冲溶液,摇匀后于37°C放置15min,加入100微升底物摇匀,此时检液开始显色反应,应立即放入仪器比色池中,记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2A2-A1=DA0

3. 样品溶液测试:先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂,再加入2.5mL样品提取液,其它操作与对照溶液测试相同,记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2A2-A1=DAt

三、结果计算

结果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。

抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100 

当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在,样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。

对阳性结果的样品,可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。

四、注意

1. 每批样品的控制时间、温度条件必须与对照溶液的条件完全一致。

2. 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有对酶有影响的植物次生物质,容易产生假阳性。处理这类样品时,不要剪的太碎。对一些含叶绿素较高的蔬菜,也不要剪的太碎。

3. 当温度条件低于37°C,酶反应的速度随之放慢,加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相对延长,延长时间的确定,应以胆碱酯酶对照溶液测试得到的吸光度A2-A1 0.3以上,即可往下操作。当对照溶液酶液的加入量大一些时,也可使A2-A10.3以上。

4. 当吸光度大到无法读取时,说明测定液浑浊有干扰。

五、产品有关技术指标

1. 代表性农药的检出下限见下表

 农药名称

检出限mg/kg

标准要求检出限mg/kg

甲胺磷

0.65

2.0

氧化乐果

0.5

0.8

敌敌畏

0.01

0.1

呋南丹

0.01

0.3

2. 乙酰胆碱酯酶的活性:(室温20°C以上进行实验)DA00.3

六、包装及保存条件

每包可做200份样品,0°C以下冰箱冷冻保质期为三年,配成试剂后保存期为一周。

 

 

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