蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药快速检测

酶抑制率（分光光度法）专用试剂（二合一）使用说明

【原理及适用范围】

在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。

本产品适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测。

【样品处理】

整株提取法（适用于韭菜、芹菜等对酶有一些抑制的蔬菜样品）

选取韭菜、芹菜有代表性的样品，擦去表面泥土，称取试样3 g（精确至0.1 g，请勿剪碎）置于20~50mL大小的瓶子，加入10 mL蒸馏水，轻轻振摇50 次，静置5min，用滤纸过滤，取上清滤液待测。

整体测定法

选取油菜、菠菜有代表性的样品，擦去表面泥土，剪成1 cm左右见方碎片，称取3 g（精确至0.1 g）放入50mL取样瓶中，加入10 mL蒸馏水，振摇50次，静置5 min，用滤纸过滤，取上清滤液待测。

【测试】

对照测试：于反应管中加入2.5mL蒸馏水，再加入100μL胆碱酯酶，混匀，放置10 min。加入100μL底物显色剂，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道，按仪器“对照”键测试3min的吸光度变化值ΔΑ0 。

样品测试：于反应管中加入2.5mL待测样品液，再加入100μL胆碱酯酶，混匀，放置10min后加入100μL底物显色剂，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道，按仪器“样品”键，测试3min的吸光度变化值ΔΑt 。

操作提示：在加底物显色剂的环节中，可预先将底物显色剂加入比色杯，待静置时间一到，马上将反应管中的反应液倒入已经加有底物显色剂的比色杯，并迅速放入测试通道进行测试。这样可以减少同时检测多个样品时因加底物时间过长而造成的误差。

结果判定：

以分光光度计测试时，按以下表达式计算出抑制率：

抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt )/ΔΑ0]×100

以农残检测仪检测时其抑制率一般可自动计算。若样品抑制率≥50%，表示被测果蔬农残超标，为阳性结果。阳性结果的样品需做2次以上重复检测，多次检测仍呈阳性需用气相色谱等仪器做进一步确认。

【注意事项】

酶活性要求：本试剂盒中酶试剂正常活性ΔΑ>0.3。若要求ΔΑ值控制在0.2~0.3之间，可根据ΔΑ测定值自行增减酶量。

保存：试剂盒应保存于4~8℃冰箱，保质期12个月。

使用：任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才使用新的，防止变质。

器具专用原则：任何用于移液的器具、容器和枪头都应各自做好标记，单独使用，以免交叉污染。

试剂只出不入原则：测试时，从任何试剂瓶吸出的试剂，禁止再次注射回试剂瓶。

环境温度对测试的影响：当环境温度过低时（一般低于20℃），测试时需作必要保温措施；产品从冰箱取出后需恢复到室温才可使用。

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